Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展较快的过程中逐渐扩展

从第一次消失肝细胞自身病原体到消失1型式心血管疾病外科副作用的困难重重所部在老年人中后期就有很好的描述，多个肝细胞自身病原体非典型的老年人中所曾70%在肝细胞内转换后10年内患上心血管疾病，而随访15年的老年人这一%提高到84%。相比之下之下，占外科1型式心血管疾病一半以上的型式1型式心血管疾病的肺癌有助于还无法赢取充分的研究者。

愈来愈多的人开始应用于分期系统来下定义1型式心血管疾病的困难重重：变异在消失多种肝细胞自身病原体时离开第1阶段，消失血压异常时离开第2阶段，消失副作用时离开第3阶段。一些多发肝细胞自身病原体非典型的变异，在1期和2期，困难重重较快，并发展为肺癌的1型式心血管疾病。我们此前描述了一第三组在首次检验到多种肝细胞自身病原体采样后数10年无心血管疾病的极快困难重重者，这第三组病征总人数少，但外观上极其明确。随后，我们断定肝细胞自身特异性特异性CD8+T细胞内反应会在困难重重缓快的病征中所基本不不存在，但在最近肺癌和普遍不存在的心血管疾病病征中所很难以检验到。这可能得出论断，与困难重重病征相比之下，这些病征自身免疫系统的调节弱化。

最初研究者得出论断，尽管调节性T细胞内(Treg)生产量正常，但心血管疾病病征不存在一些新功能缺陷，其中所都有对IL-2的反应会意志力减缓。此外，心血管疾病病征中所的震荡CD4+T细胞内可能对调节更加具抵抗性，展示出为震荡T细胞内的诱发减弱，自然导致的Treg和肾脏导致的诱发Treg，以及特异性经历的CD4+T细胞内中所IL-2反应会减弱。本研究者的目的是描述了CD4+调节性T细胞内(Treg)在一小群极缓快困难重重者中所的外观上，他们的同期为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法有：BOX研究者是一项以人群相结合的纵向研究者，在21岁以下患病的病征直系亲属中所检查和1型式心血管疾病的危险主因。我们此前描述了长期缓快困难重重者的外观上，他们保持稳定多重肝细胞自身病原体非典型超过10年，但无法消失心血管疾病的外科副作用，快性或非开展性自身免疫。随后，10名再次保持稳定无心血管疾病并愿意提供大量血液采样的缓快困难重重者纳入T和B细胞内新功能比对。在现有的研究者中所，8名快困难重重者(SP第三组)，中所位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁相互间的肝细胞自身病原体非典型。所有的旁观者都处于1型式心血管疾病困难重重的1期，尽管一些人随后失去了肝细胞自身病原体对某些特异性的抽血，然而，一名病征已经处于2期数6年，但无法消失外科副作用，一名病征被诊断为心血管疾病，该受试者72岁，在采集实验采样时，其HbA1c升温到53 mmol/mol(7%)，在统计学中所对该小分长子开展了单独评量。剥离外周血单个核细胞内(PBMCs)，采用多实例流式细胞内忍术和T细胞内诱发试验性评量小分长子中所Treg的基频、性状式和新功能。应用于FlowSOM和CITRUS(聚类比对、表征和转回)开展无监督聚类比对，评量Treg性状式。

结果：与生活品质小分长子相比之下，来自快困难重重体的遗忘CD4+T细胞内的监督聚类推测，激活的遗忘CD4+ Treg基频提高，与抗生素诱发的TNFR方面复合物(GITR)解读提高有关。一名HbA1c升温的病征与困难重重缓快者和匹配的对照第三组相比之下，Treg谱有所多种不同。新功能比对得出论断，与生活品质小分长子相比之下，来自缓快困难重重体的Treg特异性的CD4+震荡T细胞内诱发明显损害。展示出为对震荡CD4+T细胞内CD25和CD134解读的诱发提高。

由此可知1 险恶的性状式比对推测，CD4+Treg亚型式在快困难重重路由表中所提高。由FlowSOM分解的Treg过道，群聚在来自所有小分长子的活CD4+CD45RA -细胞内上。根据标识物解读比对出10个元簇:遗忘T细胞内_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;遗忘T cell_4;CD49b遗忘T细胞内;HLA-DR + GITR +遗忘T细胞内;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)应用于9个多种不同Treg标识分解的10个元簇的MST。每个路由器代表人一个空降兵(100个空降兵)，更加大的元空降兵(10个元空降兵)在路由器第三组周围上色。每个路由器中所的饼由此可知对此单个标识的解读高级别。(b)每个元聚类的热由此可知，以推测整体而言标识解读。(c, d)为HD第三组(c)和SP第三组(d)分解由此可知，以及FlowSOM识别系统的每个元簇的大块。(e-l)相比之下之下同位素为每个metacluster装入两条路线由此可知(同位素> 0.05%)确定为HD和SP第三组:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +遗忘T细胞内(h)、遗忘T cell_1(i),遗忘T cell_2 (j),遗忘T cell_3 (k) n d CD49b遗忘T细胞内(l)。紫色白点代表人这些年来SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对小写秩检验。此键适用于由此可知形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

由此可知2 应用于CITRUS的预测模型式证实，Treg基频的提高是困难重重缓快的标识。国际标准方面联(a - f)和柑橘比对(g-k)比较SP旁观者和匹配的HD旁观者在CD4+CD45RA−T细胞内上的差异。(a)互补CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的代表人性由此可知。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR解读开展剥离，精心设计FlowSOM群体。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)第三组以及小分长子SP 606(紫色)中所CD25+ cd127的基频汇总由此可知。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+方面联长子集的装入两条路线由此可知;(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)经济作物簇折叠由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读强度渐变，箭头引人注目的簇被识别系统为SP和HD路由表相互间的多种不同。(j)装入两条路线由此可知推测了在SP(蓝点)和HD(灰点)第三组中所，CITRUS遗忘Treg_3和Treg_4的相比之下之下同位素(%)。(k)控制点推测每个簇的性状式(粉红色)和Treg标识相比之下之下解读与或多或少解读(深蓝色);上列，CPUTreg_3;比如说一行，CPUTreg_4。或多或少与所有其他簇中所标识的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对小写秩检验

由此可知3 与生活品质献血者相比之下，困难重重缓快者遗忘treg的GITR提高。每个遗忘CD4+T细胞内元簇(遗忘T细胞内_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;CD49b +遗忘T细胞内;HLA-DR + GITR +遗忘T细胞内;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检验每个解读标识的变动。(a,b)来自HD (a)和S (b)路由表的解读热由此可知(sp606不都有在内)。(c,d)遗忘Treg_4元簇中所所有HD(红色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(紫色)的FlowSOM GITR解读组合成，推测控制点(c)和汇总由此可知(d)。Wilcoxon配对小写秩和检验，p< 0.07(紫色)所有小分长子都有，p< 0.05(深蓝色)小分长子SP 606和匹配的HD不都有在测试中所。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中所GITR解读，从国际标准方面联，从所有HD(红色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(紫色)组合成，推测控制点(e)和汇总由此可知(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对小写秩检验

由此可知4 来自缓快困难重重的CD4+ treg细胞内控制震荡CD4+T细胞内的意志力减缓。SP第三组用深蓝色的两条路线和白点对此，HD第三组用黑色的两条路线和白点对此，紫色的两条路线/白点对此小分长子sp606。应用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内开展分选。CD4+CD25−(需要的话者)被标识为CFSE, Treg按观察的%滴定。用抗CD3 /28微珠再造细胞内，培训3当晚开展流式细胞内忍术检验。(a-d)与CD4+需要的话者相比之下之下应的treg培训(内皮)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD需要的话者培训。(a,b,f) CFSE诱发(a,e)和CFSE诱发总和(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱发总和。应用于非典型对照(激活的声势浩大细胞内不含treg)计算诱发总和。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

由此可知5 震荡CD4+T细胞内对缓快困难重重的T细胞内再造的诱发更加敏感。SP第三组用深蓝色的两条路线和白点对此，HD第三组用黑色的两条路线和白点对此，紫色的两条路线/白点对此小分长子sp606。应用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内开展分选。CD4+CD25−(需要的话者)被cfsel标识，treg按观察的%滴定。用抗CD3 /28微珠再造细胞内，培训3当晚开展流式细胞内忍术(CD25反染)和细胞内因长子比对。HD Treg与HD、SP或sp606需要的话者协同培训。(a,b) CFSE诱发(a)和CFSE诱发%-(b)。(c,d) CD25诱发%-(c)和CD134诱发%-(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培训中所的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论断：我们得出的论断是，来自缓快困难重重长子的再造遗忘CD4+Treg在GITR解读中所赢取了扩张和多样，强调了进一步研究者Treg在1型式心血管疾病不确定性变异中所的异质性的不足之处。

文中出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28